一、幹擾來源

絲狀真菌菌絲、菌絲球、孢子懸浮造成三類誤差：

1. 固體顆粒粘附在金屬探針上，改變潤濕周長、受力讀數，數據持續漂移、平行差極大；

2. 菌絲自發遷移至氣液界麵，人為構築界麵膜，分不清是可溶性表麵活性物質，還是菌體顆粒造成張力下降；

3. 發酵液不均勻，顆粒沉降，液麵上下組分不一致，動態曲線持續震蕩。

重要結論：不存在簡單數學校正公式扣除濁度幹擾。懸浮固體顆粒帶來的是係統力學誤差，不是線性背景信號，無法直接用濁度NTU數值做減法修正。隻有兩條可行技術路線。

方案1：測胞外可溶性活性物質｜去除菌體，徹底消除濁度（主流方案）

適用目標：測定真菌分泌到胞外的可溶性生物表麵活性劑、EPS溶解組分。

1. 發酵取樣後，低速差速離心

4500–6000 r/min，15 min；沉降菌絲球、大菌絲團，小心吸取上層上清。

不要超高轉速，防止胞外大分子吸附沉降。

2. 可選溫和過濾（謹慎）

若上清仍有細微菌絲碎片，使用0.45 μm水係混合纖維素濾膜；

疏水脂肽、疏水生物表麵活性劑極易被濾膜吸附！離心後上清澄清，優先隻離心、不過濾。

3. 上清直接上機Kibron檢測

得到的張力僅代表可溶性組分，完全消除菌體濁度幹擾。

優缺點

重複性極好、數據穩定、適合橫向對比不同發酵條件；

丟失菌體本身（菌絲表麵）的界麵行為信息，無法反映完整發酵懸液原位狀態。

方案2：原位檢測（必須測完整渾濁發酵原液，保留菌絲｜最大限度降低幹擾，無法完全消除）

適用目標：研究菌絲-液體整體體係界麵行為、菌絲界麵吸附、生物膜原位特性，不能去除菌體。

隻能通過標準化操作壓製誤差，無法數學扣除濁度影響：

1. 樣品標準化預處理

取樣後輕柔顛倒混勻，禁止渦旋劇烈震蕩；超聲短時間脫氣（5 min），消除微氣泡。測試全程同一OD/濁度，保證各組菌絲濃度一致。

2. Kibron儀器操作硬性規範

① 每次測完一份渾濁樣品，探針必須火焰灼燒，燒掉粘附菌絲、多糖；

② 延長界麵平衡時間（≥20 min），等待液麵沉降達到準穩態；

③ 開啟儀器防風減震，杜絕氣流造成液麵波動；

④ 每組至少5次技術平行，舍棄劇烈震蕩、持續漂移的異常曲線。

3. 設置嚴格對照組

滅活同等濃度菌絲懸液作為空白對照，區分：

「菌絲物理顆粒帶來的幹擾」VS「活菌代謝分泌物質引起的真實張力變化」。

優缺點

保留原始發酵體係，反映真實原位界麵特征；

數據平行性變差，隻能做趨勢對比，難以精準定量張力絕對值。

二、常見誤區提醒

1. 測一組菌體懸液空白，直接用樣品張力減去空白張力

不可行。菌絲顆粒在界麵的吸附是非線性過程，動態條件下無法簡單相減校正。

2. 嚐試稀釋降低濁度

稀釋會同步降低可溶性表麵活性劑濃度，改變界麵吸附平衡，結果失效。

3. 依靠軟件基線校正消除顆粒幹擾

Kibron軟件基線隻能修正傳感器零點，不能補償固體顆粒附著探針產生的力學幹擾。

三、快速選擇建議

1. 目的：篩選產表麵活性劑菌株、優化發酵條件、定量胞外活性物質 → 采用方案1，離心取上清檢測（科研首選）；

2. 目的：研究菌絲界麵定植、生物膜初期粘附、菌體與界麵相互作用 → 方案2，原液原位檢測，搭配滅活菌絲空白對照。