材料和方法

材料

美沙拉秦（也稱為美沙拉秦或5-ASA，水溶性1.32 mg/ml，[11]log P 0.98[13]）來自Sigma-Aldrich（英國多塞特），潑尼鬆龍（log P 1.59[14]）來自塞文生物技術有限公司（英國伍斯特郡）。水、甲醇、不含過氧化氫的四氫呋喃和三氟乙酸從Fisher Scientific（英國拉夫伯勒）購買，為HPLC級。緩衝容量測定用NaOH和HCl的容量標準從Sigma-Aldrich處獲得。

胃腸組織

所有程序均由內政部批準（PPL編號70/6421），並根據英國1986年《動物（科學程序）法》進行。豬的胃腸道是在切勒肉類有限公司（英國埃塞克斯）的屠宰場從新鮮殺死的雄性動物（大白種和長白種雜交，n=3,95–110千克，6個月）獲得的。成年新西蘭大白兔（n=6,2.1-2.3 kg，9-10周）和Wistar大鼠（n=8220-255 g，8周）購自英國哈蘭有限公司（英國牛津郡）。所有動物都可以自由飲水，並在處死前自由進食：兔子，實驗室飲食5322，添加維生素C（英國諾丁漢郡IPS）；豬，Eltabreed Bingle母豬蛋糕-豬用複合飼料（ABN有限公司，英國彼得伯勒）；大鼠，Teklad全球18%蛋白質齧齒動物飲食（哈蘭有限公司）。

胃腸液

所有測量均在從動物胃腸液中獲得的上清液上進行。處死動物，將胃腸道分為胃、小腸、盲腸和結腸。如前所述，進一步細分小腸和結腸。[6,12]將胃腸液轉移到適當的容器中，然後以13200 rpm的轉速離心（德國漢堡Eppendorf AG 5415D離心機）(∼16 110×g rcf）保存20分鍾。上清液在–80°C下保存，直至分析。由於大鼠胃腸道的液體容量有限，根據解剖位置收集了8隻大鼠的液體，包括胃、小腸（近端、中部和遠端）、盲腸和結腸。這些液體的緩衝容量、滲透壓和表麵張力的特征如下所述。還測定了藥物在這些液體中的溶解度。所有測量均以一式三份進行。由於來自大鼠的液體的匯集性質，所述標準偏差代表分析變異性；然而，對於兔子和豬來說，它代表了動物間的變異性。

滲透壓

使用數字微滲透計（5R型）（德國柏林Hermann Roebling Messtechnik）測定胃腸液上清液的滲透壓，其中滲透壓是利用冰點降低理論測量的。每次測量使用100μl的體積。

表麵張力

使用Delta-8管理軟件（版本3.8）控製的Delta 8張力計（芬蘭埃斯波Kibron公司）測量表麵張力。使用DynePlates（為張力計設計的96孔板）進行測量，每個孔中有50μl上清液。

pH值和緩衝容量

使用配有FC202電極的pH計（HI99161）測量GI上清液的pH值和緩衝容量，該電極用於測量粘性和半固體材料（Hannah Instruments，Bedfordshire，UK）。在pH值變化為0.5和1.0單位時，通過向胃腸液中的300μl上清液樣品中添加小份HCl（用於腸液）或NaOH（用於胃液）來測量緩衝液容量，以達到所需的pH值變化。然後使用以下方程式計算緩衝容量：

式中，Ma是酸的摩爾濃度，Va是酸的體積（單位：毫升），Vb是緩衝液的體積（單位：毫升），ΔpH是pH單位的變化。

溶解度研究

樣品處理和溶解度測量

過量的毒品(∼20毫克強的鬆龍或∼將15mg美沙拉秦）添加到含有200μl胃腸液上清液的微離心管（Eppendorf AG）中。然後將樣品置於振蕩浴（英國拉夫伯勒加倫坎普）中，溫度保持在37°C，轉速為170 rpm。24小時後，以5000 rpm的轉速離心樣品(∼4472×g rcf）在37°C下放置10分鍾（離心機5804R，Eppendorf AG）。將上清液依次轉移至離心過濾管（康寧Spin-X，0.22μm醋酸纖維素膜，從英國萊斯特郡費希爾科學公司獲得），然後以5000 rpm離心(∼4472×g rcf）在37°C下放置20分鍾（離心機5804R，Eppendorf AG）。在分析之前，取下等份濾液（50μl）並用1950μl流動相稀釋。該方法之前已經過驗證[11]，以避免藥物在生物液體中降解或與過濾器結合而影響溶解度結果。

分析方法

使用先前報告的方法，通過配備紫外線檢測器（安捷倫科技1200係列，加利福尼亞州聖克拉拉）的反相高效液相色譜法測定樣品中溶解的潑尼鬆龍或美沙拉秦的量。[11]空白胃腸液樣品（來自“樣品處理和溶解度測量”部分的無藥物上清液）也以與測試溶解度的樣品相同的方式分析，以排除在藥物保留時間出現幹擾峰的可能性。空白樣品以與樣品相同的方式稀釋，過濾並隨後分析。色譜條件為：流動相（5%甲醇，95%水加0.05%三氟乙酸用於美沙拉秦，68.8%水，25%四氫呋喃和6.2%甲醇用於潑尼鬆龍）；反相柱，水對稱性C8 5μm 4.6×250mm（美國馬薩諸塞州米爾福德沃特斯）用於潑尼鬆龍，5μm 250×4mm（德國達姆施塔特默克）用於美沙拉秦。美沙拉秦和潑尼鬆龍分別在228nm和254 nm處檢測，保留時間分別為7.0和9.9分鍾。兩種藥物的剩餘分析條件相同（即：20μl注射量，124 bar和40°C柱溫下的流速為1 ml/min）。

統計分析

總體數據通過單向方差分析進行分析，然後使用IBM SPSS Statistics 19（美國伊利諾伊州芝加哥SPSS Inc.）進行Tukey事後分析，置信區間為95%。使用一元一般線性模型工具，結合Tukey事後分析，將物種和位置作為固定因素，事後結果的統計顯著性為P<0.05。

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——摘要、介紹

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——材料和方法

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——結果和討論

Delta-8 動物胃腸道體內中藥物的溶解度的測定——結論、致謝！